Informe de laboratorio de extracción de ADN
La bromelina es un brebaje de enzimas proteolíticas sulfhídricas. Dependiendo del lugar de extracción puede considerarse como bromelina de tallo (SBM) (EC 3.4.22.32) o bromelina de fruta (FBM) (EC 3.4.22.33). La bromelina sigue siendo enzimáticamente activa en un amplio espectro y soporta un rango de pH (5,5 a 8,0) y de temperatura (35,5 a 71 ºC). Es una de las enzimas proteolíticas más investigadas debido a sus sorprendentes aplicaciones en diversas industrias. Por ello, fue necesario emplear una estrategia que permitiera obtener la bromelina más purificada en menos pasos y a menor coste. El uso de enfoques modernos como la filtración por membrana, los sistemas micelares inversos, la extracción acuosa en dos fases y las técnicas cromatográficas han resultado prometedores en este sentido. Además de sus aplicaciones industriales, la bromelina ha sido ampliamente utilizada como un potencial compuesto fitomédico. Algunas de sus acciones reportadas incluyen la inhibición de la agregación plaquetaria, antiedematosa, antitrombótica, antiinflamatoria, modulación de citoquinas e inmunidad, desbridamiento de la piel y actividad fibrinolítica. También ayuda a la digestión, mejora la absorción de otros fármacos y es un potencial agente postoperatorio que favorece la cicatrización de las heridas y reduce las molestias y la hinchazón posquirúrgicas.
Por qué se utiliza el etanol frío en la extracción de ADN
En realidad, es bastante fácil* extraer cantidades visibles de ADN de frutas y verduras utilizando nada menos que jabón para platos y alcohol para fricciones. Para nuestra clase elegimos las fresas, pero también he oído que hay gente que utiliza kiwis y plátanos con gran éxito.
Por supuesto, se tarda apenas un segundo en que alguien diga “no como alimentos con genes” y 15 minutos en demostrar que se equivoca extrayendo ADN de un plátano (de cultivo ecológico), pero ese desequilibrio entre el tiempo y el esfuerzo que se necesita para repetir una información falsa y el tiempo que se necesita para refutar esa misma desinformación no va a cambiar. Es algo a lo que tiene que acostumbrarse cualquiera que tenga el hábito de enfrentarse a conceptos erróneos con nada más que hechos demostrables de su parte.
La manifestación en sí se desarrolló sin problemas. Desgraciadamente, al tratarse de una conferencia de cien alumnos, tuvimos que hacer la mayor parte de la preparación de antemano, por lo que no creo que la mayoría de ellos se diera cuenta de lo fáciles que pueden ser las extracciones de ADN.
*Nota que esta receta requiere el uso de ablandador de carne para romper algunas de las proteínas restantes en la solución antes de extraer el ADN, y señala que el jugo de piña será una alternativa aceptable (ya que también contiene enzimas que descomponen las proteínas.) Menciono esto sólo para reiterar mi punto, como si no lo hubieras escuchado antes, que las piñas son una de las frutas más impresionantes conocidas por la humanidad.
Extracción de ADN en casa
Puedes extraer ADN -para ver cómo es- de algunos materiales vegetales y animales utilizando equipos y productos químicos que puedes encontrar en una cocina. Para un trabajo analítico más exhaustivo, se necesita un mayor control sobre los componentes de los productos químicos, y puede merecer la pena invertir en un kit de uno de los principales proveedores. Este es un método aproximado que debería dar cantidades razonables de ADN a partir de cantidades bastante grandes de material.
1 El uso de etanol y agua helados aumenta el rendimiento del ADN. Las bajas temperaturas protegen el ADN al ralentizar la actividad de las enzimas que podrían romperlo. El ADN de una célula suele estar protegido de estas enzimas (DNasas) por la membrana nuclear, que se rompe al añadir detergente. Las DNasas en el citoplasma destruirían el ADN de los virus que entran en la célula. El etanol frío ayuda a que el ADN precipite más rápidamente. Enfríe el etanol en una botella de plástico con tapa de rosca en el congelador de la sala de preparación. Por debajo de 4 °C el etanol está por debajo de su punto de inflamación, por lo que es seguro incluso si su congelador no es a prueba de chispas.
La sal en la extracción de ADN
-Normalmente, para lisar las células se utilizan tensioactivos como el jabón de cocina. Estos no son muy sabrosos. En su lugar, empezamos con fresas congeladas, en las que la mayoría de las células ya han sido lisadas por el proceso de congelación/descongelación. Descubrimos que no era necesario ningún agente tensoactivo cuando se empezaba con la fruta congelada. Las fresas también nos dieron la mayor cantidad de ADN con diferencia, probablemente porque las cepas comerciales de fresa tienden a ser octoploides, es decir, tienen 8 copias de ADN por célula. (Véase también Cómo extraer el ADN de una fresa).
-Se suele añadir ablandador de carne para ayudar a romper las proteínas y liberar el ADN; esto imita el efecto de las proteasas que se utilizarían en un laboratorio. En su lugar, utilizamos zumo de piña, que contiene la proteasa bromelina. (Tenga en cuenta que no se debe utilizar piña enlatada, ya que el calor utilizado durante el proceso de enlatado desactiva la bromelina).
Añada un paraguas pequeño; si lo desea, puede recoger el ADN en el extremo del palillo del paraguas haciéndolo girar. Añadir consejoHacer preguntaDescargarPaso 6: Resultados y conclusionesDurante el proceso de desarrollo del protocolo, recibimos comentarios sobre las primeras versiones como “asqueroso”, “salado” y “sabe a jabón”. Nos complace informar que los comentarios sobre el producto final fueron generalmente positivos. El ADN tiene un aspecto desconcertantemente mocoso cuando está recién extraído, pero la textura no era realmente perceptible al beberlo.